在环境污染物的毒性评价和监测中，发光细菌法是一种具有快速、灵敏和廉价等优点的直接生物测试方法。鉴于海水发光细菌在土壤中应用的局限性，本文拟应用淡水发光细菌青海弧菌Q67（Vibrio-qinghaiensis sp.-Q67）进行土壤中Cu的毒性测定，并对其在土壤Cu急性毒性测定的影响因素进行了研究，包括pH对青海弧菌Q67发光的影响，背景溶液的选择及0.01 mol·L-1 CaCl2对毒性测定的影响，以期确定淡水发光细菌测定土壤Cu急性毒性最佳条件。结果表明，青海弧菌Q67可以应用于pH范围在5.5~9.0之间的样品；不同的背景溶液中，青海弧菌Q67在高浓度人工土壤溶液中的发光最稳定，且不同背景溶液对Cu的毒性测定影响差异不显著，因此，推荐高浓度人工土壤溶液作为青海弧菌Q67应用于土壤样品毒性测定的背景溶液；常用的土壤浸提剂0.01 mol·L-1 CaCl2显著降低了Cu的毒性（全Cu表示）。研究结果对青海弧菌Q67毒性测试方法的建立和在土壤中的应用提供了非常重要的依据。