啶氧菌酯(picoxystrobin)是由先正达公司开发的 一种广谱、内吸性的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，化学 名称为(E)-3-甲氧基-2-{2-[6-(三氟甲基)-2-吡啶 氧甲基]苯基}丙烯酸甲酯，分子式为C₁₈H₁₆F₃NO₄^{[1, 2]}， 主要用于防治叶面病害如叶枯病、叶锈病、颖枯病、褐 斑病、白粉病等。啶氧菌酯是一种线粒体呼吸抑制剂， 即通过在细胞色素b 和c1 间电子转移抑制线粒体 的呼吸，对14-脱甲基化酶抑制剂、苯甲酰胺类、二羧 酰胺类和苯并咪唑类产生抗性的菌株有效。由于啶氧菌酯具有内吸活性和蒸发活性，施药后有效成分能有 效再分配及充分传递，对作物叶面病菌有很好的治疗 活性^[3]。

目前，国内有朱海霞等^[4]用流动注射化学发光法 测定环境水样中的啶氧菌酯残留量，段丽芳等^[5]用气 相色谱-电子捕获检测器对西瓜中啶氧菌酯的残留 量进行分析检测，王云凤等^[6]用液相色谱-质谱法测 定果蔬中8 种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂残留量；国 外也有一些关于啶氧菌酯残留分析方法的报道， Steven 等^[7]用气-质和液-质联用仪测定蔬菜和水果 中229 种农药(包括啶氧菌酯)残留，Pilar 等^[8]用固相 微萃取前处理方法接合气-质联用仪测定婴儿食品 中甲氧基丙烯酸甲酯类杀菌剂的残留量。上述方法 在前处理、检测限及仪器设备等方面不能满足本文 研究的要求。有关啶氧菌酯在黄瓜和土壤样本中的 残留分析方法及其在土壤和黄瓜中的消解动态和规 律尚未见报道。

本文拟采用田间试验方法，研究250 g·L^-1啶氧菌 酯悬浮剂在黄瓜上使用后，啶氧菌酯在黄瓜和土壤中 的消解动态及残留状况，为啶氧菌酯在黄瓜上最大残 留限量标准的制订及250 g·L^-1啶氧菌酯悬浮剂在黄 瓜上科学合理地安全使用提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 仪器设备

Aglient7890 型气相色谱仪，带氮磷检测器(NPD) (美国安捷伦科技公司)；色谱柱：HP-5MS，30 m×320 μm×0.25 μm；Cleanet TPT 净化小柱(天津博纳艾杰尔 科技有限公司)；T-25 basic ULTRA-TURRAX 高速植 物组织捣碎机(德国IKA 公司)；Heidolph LABORO原 TA4000 型旋转蒸发仪(德国海道尔夫公司)；ZHWY- 2102C 型调速多用振荡器(中国上海智诚分析仪器制 造有限公司)；SL-302 电子天平(上海民桥精密科学 仪器有限公司)；MILLI-Q 超纯水仪(美国Millipore 公司)；SHZ-D(III)循环水式真空泵(巩义市予华仪器 有限公司)及抽滤装置等。 1.2 试剂

啶氧菌酯标准品(纯度为99.9%)，由杜邦公司提 供；乙腈、甲苯、丙酮、无水硫酸钠、氯化钠均为分析纯。 1.3 田间试验 1.3.1 试验时间

该试验开展的起止时间为2013 年5 月至2013年9月。 1.3.2 气候条件及土壤类型

试验点选在天津市西青区、山东省济南市郊区 和江苏省南京市郊区。三地的气候条件及土壤类型 见表 1。

表 1 天津、济南和南京的气候条件及土壤类型 Table 1 The climatic conditions and soil types in Tianjin City,Jinan City and Nanjing City

表选项

按照《农药登记残留田间试验标准操作规程》进 行田间试验设计^[9]。

黄瓜消解动态试验：小区面积20 m2，设3个重 复，施药剂量为900 g·hm^-2，在黄瓜长至成果1/3 大 小时施药，对施药黄瓜进行标记。施药后2 h、1 d、 3 d、7 d、14 d、21 d和30 d 时在试验小区内随机采集 标记的黄瓜2 kg，切碎混匀后按四分法留样0.5 kg， 所有样品用塑料袋封装、编号，-20 ℃冰柜低温保存 待测。

土壤消解动态试验：在试验地附近选一10 m2表 面平整、墒情适中的空白地块进行土壤残留消解动态 试验研究，施药剂量为900 g·hm^-2，与黄瓜上消解动 态试验同时进行。施药后2 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d 和30 d以随机多点方式采集土壤(0~10 cm)2 kg，将 土壤样品去除杂物，充分碾磨后过1 mm 筛混匀，按四 分法各留样250 g，所有样品用塑料袋封装、编号，-20 ℃以下低温冰柜保存待测。

最终残留试验设2 个施药剂量，分别为低剂量 600 g·hm^-2和高剂量900 g·hm^-2，各设3 次和4 次施 药处理，2 次施药间隔为7 d，每处理试验小区面积20 m2，设3个重复。在最后一次施药后1、3 d和5 d在试 验小区内随机采集黄瓜2 kg，切碎，按四分法留样200 g。每小区采土壤(0~15 cm)2 kg，去除杂物后按四分法 留样200 g。所有样品用塑料袋封装、编号，-20 ℃冰柜 低温保存待测。 1.3.4 样品的制备

土壤样品充分混合去掉草根、小石块等一切杂 物，混匀经缩分后取样250 g；黄瓜样品切碎，经混匀 缩分后留样250 g。所有样品存于-20 ℃的冰箱中冻 存待分析。 1.4 分析方法 1.4.1 提取

土壤样品：称取20.0 g样品于磨口带塞三角烧瓶 中，加入5~10 mL水和60 mL 乙腈，静置过夜，振荡1 h。抽滤并用10 mL 乙腈洗涤滤渣，滤液转入500 mL 分液漏斗中，加入氯化钠使滤液水相饱和，取上层乙 腈相并过无水硫酸钠脱水，收集乙腈相于平底烧瓶 中，旋转蒸发浓缩至1~2 mL，氮气吹干，用丙酮定容 至5 mL，待测。

黄瓜样品：称取20.0 g样品于250 mL 烧杯中，加 入60 mL 乙腈，在高速植物组织捣碎机上捣碎匀浆 2~3 min，然后再超声提取10 min，抽滤，滤液转入500 mL分液漏斗中，加入氯化钠使滤液水相饱和，分取上 层乙腈相并过无水硫酸钠脱水，收集乙腈相于平底烧 瓶中，旋转蒸发浓缩至1~2 mL，氮气吹干，用2 mL 乙 腈/甲苯(3/1，V/V)混和液溶解残余物，待净化。 1.4.2 净化

用5 mL 乙腈/甲苯(3/1)预洗Cleanet TPT 柱，将 上述样品浓缩液转移至Cleanet TPT柱后，用2 mL 乙 腈/甲苯(3/1)洗涤样液瓶3 次，并将洗涤液移入柱中， 再用25 mL 乙腈/甲苯(3/1)淋洗小柱，收集上述所有 流出物于平底烧瓶中，在40 ℃水浴中旋转浓缩至近 干，氮气吹干。用丙酮定容至5 mL，待测。 1.4.3 色谱条件

检测器：氮磷检测器(NPD)。色谱柱：HP-5MS， 30 m×0.32 mm×0.25 μm。检测温度：汽化室，240 ℃； 检测器，320 ℃。柱温：100 ℃保持1 min，以8 ℃·min^-1 的升温速率至250 ℃，保持0.5 min。气体流速：N₂(载 气)，3 mL·min^-1；H₂，3 mL·min^-1；Air，120 mL·min^-1。相 对保留时间：约16.15 min。 1.4.4 标准工作曲线的绘制

称取0.050 1 g(精确至0.000 1 g)啶氧菌酯标准 品，用丙酮溶解并配制成1 000 mg·L^-1 的标准贮备 液，试验时再用丙酮逐级稀释成啶氧菌酯质量浓度分 别为0.01、0.02、0.05、0.1、0.5 mg·L^-1 和1.0 mg·L^-1的标 准溶液。在选定的气相色谱条件下测定，以标准工作 溶液浓度为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)绘制标准 工作曲线。 1.4.5 添加回收率与相对标准偏差

分别准确称取20.0 g空白黄瓜和空白土壤，向其 中各添加适量的标准溶液，使啶氧菌酯在黄瓜和土壤 中添加的3 个浓度分别为：0.005、0.05 mg·kg^-1 和 0.25 mg·kg^-1，按上述前处理方法进行样品的提取和净化，用GC-NPD 测定。 2 结果与讨论 2.1 方法学评价 2.1.1 线性范围

用丙酮配制不同浓度的啶氧菌酯标准溶液0.01、 0.02、0.05、0.1、0.5 mg·L^-1 和1.0 mg·L^-1，在上述检测 条件下进行分析测定，求出线性回归方程为：y= 136.14x+0.339 5，相关系数r=0.999 9。标准曲线见图 1，色谱图见图 2。

图 1 啶氧菌酯标准曲线图 Figure 1 Standard curve of picoxystrobin

图选项

图 2 啶氧菌酯标准溶液色谱图（1.0 mg·L-1） Figure 2 Standard chromatogram of picoxystrobin（1.0 mg·L-1）

图选项

在上述分析方法检测条件下，以3 倍信噪比计， 仪器对啶氧菌酯的最小检出量(LOD)为3.5×10^-11 g； 本方法中，啶氧菌酯在黄瓜和土壤中添加回收的最低 浓度均可达到0.005 mg·kg^-1，即啶氧菌酯在黄瓜和土 壤中的最低检出浓度(LOQ)也为0.005 mg·kg^-1。啶氧 菌酯在黄瓜和土壤中的添加回收率见表 2。由表 2 可 见，对于2 种实验样品的3 个浓度添加5 个平行样 本，啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的添加回收率分别为 68.61豫~113.1豫和78.98豫~122.4豫；变异系数分别为2.08豫~10.5豫和1.06豫~17.2豫，表明所建立方法的准 确度和精密度均较好，符合农药残留分析要求。添加 回收色谱图见图 3。

表 2 啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的添加回收率 Table 2 Recoveries and variation coefficients of picoxystrobin in cucumber and soil

表选项

图 3 啶氧菌酯气相色谱图 Figure 3 Chromatogram of picoxystrobin using GC

图选项

分别比较了提取剂为乙酸乙酯、乙腈、丙酮的提 取效果。结果表明：除乙酸乙酯提取效率低于70%外， 其余均大于80%。虽然乙腈价格较高且对人体的危 害要强于丙酮和甲醇^[10]，含丙酮的提取剂虽然提取效 率较高，但杂质相对也较多，会给样品净化增加难度，在目标峰位置存在较大干扰，不能满足残留分析要 求。故最终选择乙腈作为提取剂。 2.2.2 净化方法

Cleanet TPT 柱填料是由石墨化炭等3 种材料按 照一定比例分层填装而成的分析茶叶中农药残留的 专用柱，先用5 mL 乙腈/甲苯(3/1)预洗，再用25 mL 乙腈/甲苯(3/1)淋洗小柱，能去除黄瓜中大部分色素、 糖分等杂质，净化效果理想。

从图 3可以看出，样品经过提取、净化后，啶氧菌 酯在保留时间左右无杂质干扰，说明净化效果较好，气相色谱的测定条件选择恰当。 2.3 啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的消解动态

啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的消解动态结果见表 3。结果表明：啶氧菌酯在天津、山东和江苏三地田间 试验的黄瓜中的消解率分别为95.45%、97.50%和 93.75%；土壤中的消解率分别为83.77%、89.51%和 78.12%。说明啶氧菌酯在黄瓜和土壤中能够得到较 快的消解，但是消解率存在差异，这与试验地的气候 条件、土壤类型等因素有关。此外值得注意的是，三地 黄瓜中啶氧菌酯的残留量在施药后3 d 均有较大的 下降，这可能是由于施药期间黄瓜质量和体积迅速增 长，其生长稀释因素在降低黄瓜中农药残留量方面也 起着重要的作用。在土壤动态试验中，出现后期采集 的土壤中啶氧菌酯的残留量比前期的高。这可能是由 于施药初期农药大都分布在土壤的表层(<1 cm)，采 样时易出现误差，装袋时与包装袋的接触也会导致农 药的附着。而经过1~3 d农药在土壤中的沉降，农药 的分布也更趋于均匀，取样混样过程中农药的损失也 会大大减小。另外田间环境复杂，很多尚不清楚的因 素也可能导致土壤消解动态试验的数据异常。但整个 试验进程中农药的降解趋势还是很明显的。

表 3 啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的消解动态 Table 3 Degradation dynamics of picoxystrobin in cucumber and soil

表选项

对啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的残留消解数据进 行回归处理，结果见表 4。由表 4 可见，啶氧菌酯在黄 瓜和土壤中的残留消解动态均符合一级动力学反应模型，啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的残留消解半衰期分 别为2.70~9.76 d和10.3~14.9 d。说明啶氧菌酯在黄 瓜和土壤中均属于易降解农药(T_1/2<30 d)。

表 4 啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的消解动态方程 Table 4 Degradation dynamics of picoxystrobin in cucumber and soil

表选项

250 g·L^-1 啶氧菌酯悬浮剂在黄瓜上的施药剂量 分别为低剂量600 g·hm^-2 和高剂量900 g·hm^-2，在黄 瓜生长到1/3 成果大小时开始第一次施药，各设3 次 和4次施药处理，2次施药间隔为7 d。距最后一次施 药1、3 d和5 d每小区随机采集黄瓜样品和土壤样品 进行残留测定。结果表明，距黄瓜最后一次施药5 d 时，啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的最高残留量分别为 0.013 6 mg·kg^-1和0.790 8 mg·kg^-1。

我国和国际食品法典委员会(CAC)暂无啶氧菌 酯在黄瓜中的最大残留限量(MRL)的规定，欧盟2008年9 月规定啶氧菌酯在黄瓜中的最大残留限量0.05 mg·kg^-1，暂以此规定为依据，250 g·L^-1 啶氧菌酯悬浮 剂在黄瓜上的施药剂量分别为低剂量600 g·hm^-2 和 高剂量900 g·hm^-2，在黄瓜生长到1/3 成果大小时开 始第一次施药，各设3 次和4 次施药处理，2 次施药 间隔为7 d，距最后一次施药5 d时，黄瓜中啶氧菌酯 的残留量是安全的。 3 结论

(1)建立了采用GC-NPD测定黄瓜和土壤中啶氧 菌酯残留量的分析方法。方法操作简便，准确性及灵 敏度满足农药残留检测的要求。所使用的仪器设备均 为常规设备和试剂，适用性强，适合于大部分农药残 留检测实验室进行啶氧菌酯残留的检测。

(2)啶氧菌酯在黄瓜和土壤中的残留消解半衰期 分别为2.70~9.76 d和10.3~14.9 d。啶氧菌酯在黄瓜和 土壤中的残留消解半衰期存在一定的差异，这与在三 地施药后天气条件、土壤类型及理化性质等因素有关。

(3)以推荐施药剂量600 g·hm^-2 和1.5 倍推荐施 药剂量900 g·hm^-2，在黄瓜生长到1/3 成果大小时开 始第一次施药，各设3 次和4 次施药处理，2 次施药 间隔为7 d，距最后一次施药5 d时，啶氧菌酯在黄瓜 中的最高残留量低于欧盟2008 年9 月规定的啶氧菌 酯在黄瓜中的最大残留限量0.05 mg·kg^-1(我国没有 相关的残留限量数据)，由此表明，在该试验条件下， 啶氧菌酯在黄瓜中的残留是安全的。